در تعیین افتراقی انتروباکتری ها و برخی ویبریوها، واکنش Voges-Proskauer جایگاه ویژه ای را اشغال می کند. این آزمایش بر اساس توانایی باکتری ها در تخمیر گلوکز برای تشکیل استوئین است.
ماهیت فرآیند تحقیق
در میکروبیولوژی، واکنش Voges-Proskauer اغلب برای تمایز در خانواده انتروباکتری‌های یرسینیا (شامل پاتوژن‌های کاذب سل و انتروکولیت)، اشریشیا کلی و هوازی‌های اسپورساز استفاده می‌شود. هنگامی که معرف های خاصی اضافه می شوند، نتیجه با رنگ آمیزی محیط قابل مشاهده است.
این تست متعلق به سری IMViC (مخفف Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) است - گروهی از تست های شناسایی شامل تعاریف دیفرانسیل:
- با ایندول، بر اساس تجزیه تریپتوفان به ایندول، مورد استفاده در حضور یک معرف Kovacs یا Ehrlich؛
- با استفاده ازمتیل روث یا متیل رد، که pH معینی را در نتیجه متابولیسم گلوکز تشخیص می دهد؛
- واکنش های Voges-Proskauer برای تشخیص استیل-متیل کربینول؛
- استفاده از سیترات با تغییر رنگ در نتیجه قلیایی شدن محیط.
ماهیت این فرآیند تجسم حضور باکتری های تشخیص داده شده به دلیل برهمکنش استوئین تشکیل شده توسط آنها با پتاس سوزاننده در حضور اکسیژن است. استیل متیل کاربینول به دی استیل اکسید می شود که یک ترکیب قرمز روشن یا صورتی را تشکیل می دهد. قبل از افزودن پتاس سوز آور، حساسیت آزمایش را با استفاده از آلفا نفتول افزایش دهید.
تنظیم تست
فرمولاسیون واکنش Voges-Proskauer شامل کشت اولیه میکروارگانیسم ها است. یک کشت خالص روی محیط تشخیصی افتراقی کلارک کاشته می شود که یک نوع آن براث کلارک (بدون افزودن آگار-آگار) است. یا از محیط آماده استفاده می شود یا به طور مستقل تهیه می شود. مواد تشکیل دهنده عبارتند از:
- 5g پپتون؛
- 5g گلوکز؛
- 5g دی بازیک فسفات پتاسیم؛
- 1L تقطیر.
در طول مطالعه، کشت با یک حلقه باکتریولوژیک استریل در یک محیط مایع تلقیح می شود. مقدار - 5 میلی لیتر در یک لوله آزمایش به علاوه کنترل. جوجه کشی در دمای 35-37 درجه به مدت دو روز انجام می شود. در مرحله بعد، مطالعه واکنش Voges-Proskauer در مراحل انجام می شود:
- 2، 5 میلی لیتر از کشت براث به یک لوله استریل منتقل می شود.
- شش قطره آلفا نفتول (محلول الکل 5٪) اضافه کنید.
- 40% اضافه کنیدمحلول پتاسیم سوزاننده به مقدار 0.1 میلی لیتر یا دو قطره.
- هم زدن با تکان دادن آرام لوله آزمایش انجام می شود.
- نتیجه را پس از 15 دقیقه از شروع آزمایش ارزیابی کنید.
یک روش آزمایش جایگزین انکوباسیون یک شبه است که زمان آن به 18 ساعت یا تا یک روز کاهش می یابد. علاوه بر این روش، از یک آزمایش اکسپرس نیز استفاده می شود: یک کشت به صورت حلقه ای در 2 میلی لیتر از محیط وارد می شود، حدود چهار ساعت انکوبه می شود، سپس معرف ها به مقدار مساوی 2-3 قطره اضافه می شوند، مخلوط می شوند و نتیجه پس از ده دقیقه ارزیابی می شود.
کنترل یکی از عوامل ایجاد کننده ذات الریه Klebsiella pneumoniae - سویه atcc 13883 است.
ارزیابی نتیجه
بعد از زمان لازم پس از افزودن معرفها (از 5 تا 15 دقیقه) باید رنگ قرمز گیلاسی با واکنش مثبت مشخص قرمز و صورتی - با واکنش مثبت ضعیف مشاهده شود. هیچ تغییری به عنوان نتیجه منفی ثبت نمی شود.
بیش از حد پتاس سوزاننده در محلول می تواند تقلیدی از یک واکنش مثبت ایجاد کند، رنگ آمیزی به رنگ مسی. در این صورت باید پاسخ منفی کلنی مورد آزمایش ثبت شود. همچنین در مواردی که ارزیابی یک ساعت پس از معرفی معرف ها انجام می شود، رنگ آمیزی مس ظاهر می شود.
هنگام ارزیابی نتیجه باید در نظر گرفت که کشت طولانی مدت میکروارگانیسم های مورد مطالعه (بیش از سه روز) منجر به اسیدی شدن محیط می شود که می تواند منجر به نتیجه نادرست مطالعه شود. واکنش ممکن است خفیف مثبت یامنفی کاذب.
شرایط مورد نیاز برای معرف های آزمایشی
معرفهای Voges-Proskauer باید شرایطی مانند غلظت صحیح، خلوص بالا و پایداری را داشته باشند که از طریق ذخیره سازی مناسب حاصل می شود.
کیت‌های آزمایش آماده معمولاً حاوی معرف‌هایی برای ۱۰۰ کاربرد یا بیشتر هستند و در ویال‌های پلاستیکی یا شیشه‌ای رنگی عرضه می‌شوند. کیفیت توسط اسناد مربوطه تنظیم می شود.
